牛脫氧核糖核酸酶I(DNase-I)Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書 以下是天正信達(dá)牛脫氧核糖核酸酶I(DNase-I)ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)說明書，整合自多個廠商的規(guī)范操作流程： 一、實(shí)驗(yàn)原理 采用雙抗體夾心法：預(yù)包被在微孔板上的牛DNase-I抗體捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白，與HRP標(biāo)記的檢測抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后通過450nm吸光度定量。 二、試劑盒組成(96T/48T配置) 預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔或48孔(可拆卸) 標(biāo)準(zhǔn)品?：0.781-50ng/mL梯度濃度(凍干粉或液體) 檢測抗體?：HRP標(biāo)記的羊抗牛IgG 顯色液?：TMB底物A/B液 終止液?：2M硫酸溶液 30×濃縮洗滌液?：需用蒸餾水稀釋 樣本稀釋液?：PBS緩沖液(含蛋白穩(wěn)定劑) 三、樣本處理 血清/血漿?： 采集后室溫靜置30分鐘，3000g離心10分鐘分離上清 避免溶血(溶血樣本OD值可能偏高) 組織勻漿?： 按重量體積比1:9加入PBS勻漿，3000g離心10分鐘取上清 保存條件?： 短期(1周內(nèi))可存于4℃，長期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融) 四、操作步驟 試劑平衡?：所有組分室溫平衡30分鐘(濃縮洗滌液需溶解) 加樣孵育?： 每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→50μL酶標(biāo)試劑→37℃孵育60分鐘 洗滌?：棄液后拍干，每孔加滿稀釋洗滌液靜置30秒，重復(fù)5次 顯色?：加入TMB A/B液各50μL，37℃避光反應(yīng)15分鐘 終止與檢測?：加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測定450nm OD值(參考波長630nm) 五、注意事項(xiàng) 質(zhì)量控制?： 批內(nèi)CV<10%，批間CV<12% 標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.99 干擾因素?： 避免使用NaN?防腐劑(會抑制HRP活性) 顯色液變藍(lán)即終止，避免過度反應(yīng) 安全提示?：終止液具腐蝕性，需穿戴防護(hù)裝備 六、結(jié)果計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，四參數(shù)擬合計(jì)算樣本濃度。若樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，需用稀釋液適當(dāng)稀釋后復(fù)測。 七、常見問題 高背景值?：可能因洗滌不充分或樣本脂質(zhì)含量高，建議增加洗滌次數(shù) 低靈敏度?：檢查試劑保存條件(HRP標(biāo)記抗體需避光-20℃保存) 注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際標(biāo)準(zhǔn)，不同品牌試劑盒可能存在參數(shù)差異，請以實(shí)際說明書為準(zhǔn)，具體請咨詢技術(shù)老師。 天津天正信達(dá)供應(yīng)：RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進(jìn)樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實(shí)驗(yàn)耗材，我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺，主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。 | 
