使用目的： 本試劑盒用于測定植物組織，細胞及相關液體樣本中百合斑駁病毒(LMoV)表達。實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中百合斑駁病毒(LMoV)表達。用純化的百合斑駁病毒(LMoV)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中百合斑駁病毒(LMoV)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的百合斑駁病毒(LMoV)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中百合斑駁病毒(LMoV)的存在與否。 試劑盒組成 標本要求 1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 2.不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同) 2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻， 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘. 10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。 11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 計算和結果判定： 試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20 臨界值(CUT OFF)計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陰性 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陽性 。 注意事項 1.操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。 3.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5.底物請避光保存。 6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm 7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須 注意安全。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存：;2-8℃。 2.有效期：6個月 注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說明，可咨詢技術老師或品牌供應商的詳細文檔。
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