大鼠白介素12(IL-12P70)ELISA試劑盒實驗說明書 一、試劑盒組成 預包被抗體的96孔板(進口高親和力抗體) 重組凍干標準品(需按說明書復溶) 生物素化檢測抗體(避光保存) 鏈霉親和素-HRP復合物(ABC稀釋液配制) TMB顯色液與終止液(含硫酸) 樣本稀釋液(含穩定劑) 洗滌緩沖液(20×濃縮液) 二、檢測原理 采用雙抗體夾心法： 固相抗體捕獲樣本中的IL-12 p70 生物素化抗體結合目標抗原 鏈霉親和素-HRP催化TMB顯色 450nm波長讀值(參考波長540/570nm) 三、操作流程 樣本處理 血清/血漿：避免溶血，4℃短期保存，-80℃長期保存 細胞上清：離心去除顆粒物，建議新鮮檢測 實驗步驟 標準品梯度稀釋(建議7點濃度) 每孔加樣100μL(標準品/樣本/空白) 37℃孵育90分鐘 洗滌3次(每次拍干) 加檢測抗體(100μL/孔)，37℃孵育60分鐘 加ABC復合物(100μL/孔)，避光孵育30分鐘 顯色15分鐘(避光)，加終止液終止反應 四、關鍵參數 項目參數 靈敏度7-14.2pg/mL(不同品牌差異) 檢測范圍15.6-1000pg/mL(線性區間) 重復性板內/板間CV<10% 交叉反應不與IL-6、G-CSF等混淆 五、注意事項 所有試劑使用前需平衡至室溫(25℃) 顯色反應需嚴格控制時間(±30秒) 終止液含腐蝕性成分，需佩戴防護裝備 建議每次實驗建立新標準曲線 異常值需復測(建議n=3) 六、結果計算 以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制曲線 四參數邏輯回歸擬合 樣本濃度=擬合方程計算值×稀釋倍數 七、性能驗證 回收率測試：建議加標回收率85%-115% 穩定性評估：開封后試劑需2-8℃避光保存 注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。 | 
